气相色谱剖析要领建设
2015-05-13
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在现实事情中，当我们拿到一个样品，我们该怎样定性和定量，建设一套完整的剖析要领是要害，下面介绍一些通例的办法：
1、样品的泉源和预处置惩罚要领GC能直接剖析的样品通常是气体或液体，固体样品在剖析前应当消融在适当的溶剂中，并且还要包管样品中不含GC不可剖析的组分（如无机盐），可能会损坏色谱柱的组分。这样，我们在接到一个未知样品时，就必需相识的泉源，从而预计样品可能含有的组分，以及样品的沸点规模。若是样品系统简朴，试样组分可汽化则可直接剖析。若是样品中有不可用GC直接剖析的组分，或样品浓度太低，就必需举行须要的预处置惩罚，如接纳吸附、剖析、萃取、浓缩、稀释、提纯、衍生化等要领处置惩罚样品。
2、确定仪器设置所谓仪器设置就是用于剖析样品的要领接纳什么进样装置、什么载气、什么色谱柱以及什么检测器。一样平常应首先确定检测器类型。碳氢化合物常选择FID检测器，含电负性基团（F、Cl等）较多且碳氢含量较少的物质易选择ECD检测器 ；对检测迅速度要求不高，或含有非碳氢化合物组分时，可选择TCD检测器 ；关于含硫、磷的样品可选择FPD检测器。关于液体样品可选择隔膜垫进样方法，气体样品可接纳六通阀或吸附热剖析进样要领，一样平常色谱仅设置隔膜垫进样方法，以是气体样品可接纳吸附-溶剂剖析-隔膜垫进样的方法举行剖析。凭证待测组分性子选择适合的色谱柱，一样平常遵照相似相容纪律。疏散非极性物质时选择非极性色谱柱，疏散极性物质时选择极性色谱柱。色谱柱确定后，凭证样本中待测组分的分派系数的差值情形，确定色谱柱事情温度，简朴系统接纳等温方法，分派系数相差较大的重大系统接纳程序升温方法举行剖析。常用的载气有氢气、氮气、氦气等。氢气、氦气的分子量较小常作为填充柱色谱的载气 ；氮气的分子量较大，常作为毛细管气相色谱的载气 ；气相色谱质谱用氦气作为载气。
3、确定初始操作条件当样品准备好，且仪器设置确定之后，就可最先举行实验性疏散。这时要确定初始疏散条件，主要包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度和载气流速。进样量要凭证样品浓度、色谱柱容量和检测器迅速度来确定。样品浓度不凌驾10mg/mL时填充柱的进样量通常为1-5uL，而关于毛细管柱，若分流比为50：1时，进样量一样平常不凌驾2uL。进样口温度主要由样品的沸点规模决议，还要思量色谱柱的使用温度。原则上讲，进样口温度高一些有利，一样平常要靠近样品中沸点最高的组分的沸点，但要低于易剖析温度。
4、疏散条件优化疏散条件优化目的就是要在最短的剖析时间内抵达切合要求的疏散效果。在改变柱温顺载气流速也达不到基线疏散的目的时，就应替换更长的色谱柱，甚至替换差别牢靠相的色谱柱，由于在GC中，色谱柱是疏散成败的要害。
5、定性判断所谓定性判断就是确定色谱峰的归属。关于简朴的样品，可通过标准物质比照来定性。就是在相同的色谱条件下，划分注射标准样品和现实样品，凭证保存值即可确定色谱图上哪个峰是要剖析的组分。定性时必需注重，在统一色谱柱上，差别化合物可能有相同的保存值，以是，对未知样品的定性仅仅用一个保存数据是不敷的，双柱或多柱保存指数定性是GC中较为可靠的要领，由于差别的化合物在差别的色谱柱上具有相同保存值的几率要小得多。条件允许时可接纳气相色谱质谱联机定性。
6、定量剖析要确定用什么定量要领来测定待测组分的含量。常用的色谱定量要领不过乎峰面积（峰高）百分比法、归一化法、内标法、外标法和标准加入法（又叫叠加法）。峰面积（峰高）百分比法最简朴，但最禁绝确。只有样品由同系物组成、或者只是为了简陋地定量时该法才是可选择的。相比而言，内标法的定量精度最高，由于它是用相关于标准物（叫内标物）的响应值来定量的，而内标物要划分加到标准样品和未知样品中，这样就可抵消由于操作条件（包括进样量）的波动带来的误差。至于标准加入法，是在未知样品中定量加入待测物的标准品，然后凭证峰面积（或峰高）的增添量来举行定量盘算。其样品制备历程与内标法类似但盘算原理则完全是来自外标法。标准加入法定量精度应该介于内标法和外标法之间。
7、要领的验证所谓的要领验证，就是要证实所开发要领的适用性和可靠性。适用性一样平常指所用仪器设置是否所有可作为商品购得，样品处置惩罚要领是否简朴易操作，剖析时间是否合理，剖析本钱是否可被偕行接受等�？煽啃栽虬ǘ康南咝怨婺！⒓觳庀蕖⒁旖幽陕省⒅馗葱浴⒅叵中院妥既范鹊�。色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理疏散手艺，将它用于剖析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱剖析法。色谱法的最早应用是用于疏散植物色素，其要领是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端连忙泛起几种颜色的混淆谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带一直地向下移动，并逐渐脱离成几个差别颜色的谱带，继续冲洗就可划分接得种种颜色的色素，并可划分举行判断。色谱法也由此而得名。现在的色谱法早已不局限于色素的疏散，其要领也早已获得了极大的生长，但其疏散的原理仍然是一样的。我们仍然叫它色谱剖析。
一、色谱疏散基来源理：
由以上要领可知，在色谱法中保存两相，一相是牢靠不动的，我们把它叫做牢靠相 ；另一相则一直流过牢靠相，我们把它叫做流动相。色谱法的疏散原理就是使用待疏散的种种物质在两相中的分派系数、吸附能力等亲和能力的差别来举行疏散的。使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一牢靠于柱中或平板上、与流动相互不相溶的牢靠相外貌。当流动相中携带的混淆物流经牢靠相时，混淆物中的各组分与牢靠相爆发相互作用。由于混淆物中各组分在性子和结构上的差别，与牢靠相之间爆发的作用力的巨细、强弱差别，随着流动相的移动，混淆物在两相间经由重复多次的分派平衡，使得各组分被牢靠相保存的时间差别，从而按一定序次由牢靠相中先后流出。与适当的柱后检测要领团结，实现混淆物中各组分的疏散与检测。
二、色谱分类要领：
色谱剖析法有许多种类，从差别的角度出发可以有差别的分类要领。从两相的状态分类：色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。牢靠相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。
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